El 28 de Diciembre de 1917 se crea con el propósito de dar culto y guarda al Santo Cáliz de la Cena, fecha de sus primeras constituciones, confirmadas por el Cabildo el 15 de febrero de 1.918, por acuerdo de la mayor parte de los Caballeros que integraban en aquel entonces la nobleza titulada de Valencia.
En 1.915 el Cabildo adopta por acuerdo exponer la reliquia de forma pública y permanente a la veneración de los fieles, obrando en 1.916 las reestructuraciones necesarias para habilitar como capilla la Antigua Sala Capitular.
La Real Hermandad persigue como fines, además del mencionado, y de la protección de sus intereses corporativos, los relacionados con el mundo de la cultura y la asistencia a familias y personas desvalidas.
Al constituirse como Hermandad se coloca bajo el amparo de Don Alfonso XIII, quien, como Hermano Mayor le concedió el título de Real.
En sus inicios solo estaba integrada por títulos del Antiguo Reino de Valencia u originarios de la Corona de Aragón. Tras la reforma estatutaria del 27 de enero de 1.923 se hace extensiva a los Títulos de los otros reinos y a los Caballeros de las cuatro órdenes españolas y de Malta.
En una posterior reforma llevada a cabo el 11 de mayo de 1.948, se hace también extensiva a los integrantes de las Maestranzas de Caballería, de los Reales Cuerpos de la Nobleza de Madrid y de Cataluña, así como la del Principado de Gerona.
En unas últimas modificaciones estatutarias llevadas a cabo el 30 de mayo de 1.986, y del 11 de junio de 1.999, se permite el ingreso de todos los Títulos del Reino.
Está inscrita en el Registro de Asociaciones de la Generalidad Valenciana y desde 1.993 tiene casa en Madrid.
El 20 de febrero del 2.000 el Rey Don Juan Carlos, que había ingresado siendo Príncipe de Asturias en 1.953, ratificó el Título de Real y aceptó la dignidad de Hermano Mayor Honorario.
La Corporación tiene por patrones a Nuestra Señora de los Desamparados y a San Francisco de Borja.
No debe de confundirse con la Cofradía del Santo Cáliz de la Cena, instituida en 1.955 y que tiene su sede social en la misma Catedral de Valencia.
Su insignia consiste en un escudo en forma de rombo de oro con cuatro palos de gules. Cargado de un escusón obalado puesto en el abismo con el Santo Caliz. Todo el escudo superado de una corona real.